Pfu DNA Polymerase

Cat. #：P1021，P1022，P1023，P1024

产品简介

Pfu DNA Polymerase是极端嗜热性细菌Pyrococcus furiosus来源的高度热稳定DNA聚合酶，分子量为90 KD。其保真性是普通Taq DNA聚合酶的10倍左右。扩增片段的长度可达5 kb（简单模板）。延伸速度为2min/kb（70~75℃，简单模板可达20s/kb）。该酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，扩增产物具有平末端。

产品组成

[1] 10× Pfu Buffer分为Mg²⁺ Plus与Mg²⁺ Free两种包装，可方便选择。如无特别说明提供10× Pfu Buffer(Mg²⁺ Plus)。Mg²⁺ Free的10×Pfu Buffer提供25 mM MgCl₂。

[2] 6× Loading Buffer，如有需要可单独购买（Cat. #：M9041）。

[3] dNTPs是dATP、dGTP、dCTP和dTTP等摩尔混合物，P1021/P1023不含dNTPs，如有需要请单独购买（Cat. #：P9011/P9012/P9013）。

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存条件

-20℃保存2年。

问：Pfu DNA聚合酶的保真性为何高于Taq DNA聚合酶？

答：这是由于Pfu DNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性，可在扩增的过程中，切掉错配的碱基，降低碱基错配率。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5，而Pfu

DNA聚合酶的碱基错误率仅为1×10-6。Pfu DNA聚合酶主要用于基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变等对保真性有很高要求的实验。其扩增产物只具有

平末端，可直接用于平末端连接。要提高TA克隆效率，建议对PCR产物纯化后，加A再进行TA克隆，加A方法见**页。

问：Pfu DNA聚合酶能扩增多大的片段？

答：对于简单模板，可以扩增2 kb以下的片段。扩增长片段时，能否扩增成功主要与模板与引物的设计有关。为获得良好的扩增结果，建议引物长度大于18 bp，

Tm在55-80℃之间，浓度在0.1-0.5μM之间，略高于Taq。如需要很高的保真性，且又扩增较长片段时，建议选择Fusion pfu DNA聚合酶。

问：Pfu DNA聚合酶的扩增效率为何低于Taq DNA聚合酶？

答：这可能决定于Pfu DNA聚合酶本身的结构与特性。且具有核酸外切酶的活性，容易降解PCR引物。建议在配制PCR反应时，最后加入Pfu DNA聚合酶或使用

PfuMix。

问：使用Pfu DNA聚合酶扩增时，有没有必要在冰上配制PCR反应液？

答：有必要。建议在冰上配制PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性条带背景，获得良好的PCR结果。